冯陈慧 彭凡珂 寇力丹
[摘要]意图 评论野茼蒿冻干粉对溃疡性结肠炎（UC）大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10表达的影响。办法 选取健康雄性SD大鼠76只，先随机选出12只大鼠作为空白对照组，其他大鼠用TNBS/乙醇混合液诱导树立UC大鼠模型。造模成功后，一切大鼠每天用不同药物灌胃处理，调查大鼠的疾病活动指数（DAI）。第21天后下腔静脉取血，用ELISA法检测其血清中的细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10含量。成果 与模型组和阳性对照组比较，野茼蒿各剂量组促炎因子IL-6、IL-8、TNF-α含量不同程度下降（P<0.01或P<0.05），抗炎因子IL-10含量不同程度升高（P<0.01或P<0.05）。定论 野茼蒿冻干粉对UC大鼠的症状有必定的缓解效果，其机制或许与影响TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10的表达有关。
[关键词]溃疡性结肠炎；野茼蒿；促炎细胞因子；抗炎细胞因子
[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）08（a）-0004-03
[Abstract]Objective To investigate the influence of freeze dried powder of Crassocephalum crepidioides on the expression of serum cytokines TNF-α，IL-6，IL-8 and IL-10 in rats with ulcerative colitis （UC）.Methods 76 healthy male SD rats were randomly selected.Twelve rats were randomly selected as blank control group.The other rats were induced with TNBS/ethanol mixture to establish UC rat model.After successful model，all rats were treated with different drugs every day to observe the disease activity index （DAI）.The level of TNF-α，IL-6，IL-8 and IL-10 in the serum were measured by ELISA.Results Compared with model group and positive control group，the level of proinflammatory cytokines IL-6，IL-8 and TNF-α were decreased in varying degrees （P<0.01 or P<0.05），and the level of anti-inflammatory factor IL-10 were increased in varying degrees in different dose group of Crassocephalum crepidioides （P<0.01 or P<0.05）.Conclusion The freeze-dried powder of Crassocephalum crepidioides has a certain effect on the symptoms of UC rats.The mechanism may be related to influencing the expression of TNF-α，IL-6，IL-8 and IL-10.
[Key words]Ulcerative colitis；Crassocephalum crepidioides；Proinflammatory cytokines；Antiinflammatory cytokines
溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的发病机制与免疫要素有关。近年来，中医药医治UC的分子生物学和免疫学研讨也取得了必定开展，白头翁汤、黄芩汤、四逆汤、乌梅丸和参苓白术散等中成药能改动UC大鼠血清或结肠安排中细胞因子含量[1]。研讨标明，野茼蒿具有按捺肝癌和肺癌及皮肤癌症等成效， 调理机体免疫功用的效果[2]。现代临床医学试验证明，野茼蒿可医治缓慢肠胃病和习惯性便秘[3]，可是现在国内外关于野茼蒿的相关研讨较少，亦无野茼蒿对UC大鼠血清中相关细胞因子的研讨。本實验首要评论野茼蒿对UC大鼠细胞因子的影响，为野茼蒿对UC的药用价值供给临床根据。
1材料与办法
1.1首要试剂和仪器
1.1.1试验动物 76只雄性健康SD大鼠，体重（220±20）g，购于哈尔滨医科大学试验动物学中心，动物合格证号：SCXK（黑）2013001。
1.1.2药物与试剂 野茼蒿冻干粉：由小组成员于四川盆地收集，选择光照富余、长势杰出的植株，收集后用清水洗净，天然风干。选取充沛枯燥的野茼蒿1 kg，用适量蒸馏水浸泡后，再加10倍体积的蒸馏水，煮沸2.5 h，重复3次，兼并水煎液，用滤纸将溶液过滤，减压真空浓缩，冷冻枯燥构成冻干粉，于-20℃冰箱中保存备用[4]，野茼蒿冻干粉内服成人用量为25～50 g/d，以50 g核算，按成人体重60 kg核算，成人用量大约为0.85 g/kg。大鼠低中高剂量按成人的2、4、8倍换算，则低中高三个剂量组的用量别离为1.7、3.4、6.8 g。所得样品别离溶于2 ml双蒸水中备用；2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）（美国Sigma公司，批号：109K5008）的50%（体积分数）的乙醇溶液；水合氯醛（国药集团化学试剂有限公司，批号：20130314）；96孔大鼠IL-6 ELISA试剂盒（产品编号：YY41731）、IL-8 ELISA试剂盒（产品编号：YY41716）、IL-10 ELISA试剂盒（产品编号：YY41736）、TNF-α ELISA（产品编号：YY41721）试剂盒：购于上海源叶生物科技有限公司；柳氮磺胺吡啶（SASP）肠溶片（上海中西三维药业有限公司，批号：31020450），成人用量2～3 g/d，（按3 g核算，以成人体重60 kg预算）成人用量约为0.05 g/kg。则大鼠用量为0.2 g/kg（按成人的4倍换算）将药物用蒸馏水配成200 ml的溶液[5]，4℃冰箱保存备用。endprint
1.2 试验办法
1.2.1 UC大鼠造模 先随机选取12只SD大鼠，正常养殖，不做处理，设定为空白对照组，余下的64只SD大鼠悉数进行造模处理。先对这64只大鼠禁食不由水处理24 h，然后用腹腔打针法将10%水合氯醛（0.25 ml/100 g）注入大鼠腹腔内对大鼠进行麻醉，腹腔打针时留意将大鼠头朝下，尾部歪斜向上，使体内脏器上移，防止打针器扎到内脏。麻醉成功后，将TNBS/乙醇溶液（100 mg/kg TNBS+50%的乙醇0.25 ml）溶液缓慢推入大鼠肛门靠里一段距离，让动物坚持下腹部上倾情况，捏紧肛门4 min，放回笼中，天然清醒[6]。
1.2.2 分组 造模后调查3 d，大鼠逝世2只，再随机选择2只大鼠处死，将这4只大鼠进行解剖，取其结肠安排，承认模型结构成功。将剩余的UC大鼠随机分为5组：模型组，野茼蒿低剂量组，野茼蒿中剂量组，野茼蒿高剂量组，阳性对照组（SASP组），用苦味酸给各组大鼠进行编号。
1.2.3 给药办法 造模后第3天开端，阳性对照组给予SASP混悬液灌胃0.20 g/㎏；野茼蒿各剂量组别离给予0.85、1.70、3.40 g野茼蒿冻干粉溶液2 ml灌胃，空白对照组和模型组给予2 ml生理盐水灌胃，1次/d，接连21 d。
1.2.4 评分 继续调查大鼠体质量改变、大便性状、便血等情况。参照 Marines等[7]所列的规范进行评分，疾病活动指数（DAI）=（体重+大便形状+大便出血）/3。评分规范：无体质量下降、大便性状正常、无便血记为 0分； 体质量下降1%～5%记为1分；体质量下降5%～10%、半稀便、大便隐血（+）记2分；体质量下降10%～15%记为3分；体质量下降>15%、稀便、便血记为4分。
1.2.5 选材及测定 各组大鼠最终一次灌胃后禁食不由水24 h，用10%水合氯醛溶液（0.3 ml/kg体重）麻醉大鼠，下腔静脉取血5 ml，离心后别离血清，用ELISA试剂检测血清TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10水平，检测办法参照说明书，记载成果。
1.3计算学剖析
数据选用计算软件SPSS 17.0处理，计量材料以x±s标明，组间比较选用单要素方差剖析，以P<0.05为差异有计算学含义。
2成果
2.1各组DAI评分的比较
空白对照组DAI值一向坚持较低，且动摇不大，与空白对照组比较，模型组评分显着升高，差异有计算学含义（P<0.01）。与模型组比较，各医治组评分均显着下降（P<0.05或P<0.01）（表1）。
2.2各组细胞因子的比较
与空白对照组比较，模型组大鼠血清中IL-6，IL-8和TNF-α水平上升或显着上升（P<0.05或P<0.01），IL-10水平显着下降（P<0.01）；与模型组大鼠比较，野茼蒿中、高剂量组和SASP组大鼠血清IL-6，IL-8和TNF-α水平下降或显着下降（P<0.05或P<0.01），IL-10值上升或显着上升（P<0.05或P<0.01）（表2）。
3评论
UC是一种结肠和直肠的缓慢炎症性疾病，发病机制还不切当，结肠溃疡、黏液脓血便、腹泻等为其首要体现，该病病程长，且简单复发，难以治好。大部分学者以为，UC的发病与环境、肠道微生物和遗传易理性一起效果相关，这些要素引起肠道免疫功用异常，构成结肠和直肠炎症性病变。缓慢UC简单开展成结肠癌，因而遭到国内外医学界的广泛重视[8]。
免疫系统（包含免疫细胞、免疫因子及免疫球蛋白）对肠道反响的调理有重要效果，UC的发病触及T细胞亚群和炎症介质的改变[9]。近年来，研讨标明，UC发作与开展的关键性要素就是免疫要素[10]，UC疾病进程中的一个重要环节包含不同细胞因子之间的网络效果[11]。其间，与UC病理进程密切相关的有TNF-α、IL-6、IL-8等促炎因子[12]和IL-4、IL-10等抗炎因子[13]，在UC的整个疾病进程中，促炎因子和抗炎因子的继续失衡起非常重要的效果[14-15]。
本试验成果显现，与空白对照组比较，造模各组不同程度呈现精力萎靡、体重减轻、稀便、黏液血便等症状，且促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8水平较高，而IL-10这一抗炎因子水平较低，标明在UC大鼠血清中，促炎因子升高，且升高程度与炎症严峻程度成正相关，抗炎因子下降，且下降程度与炎症严峻程度成负相关。与模型组比较，各给药组大鼠这些症状继续时间较短，在给药进程中，疾病活动指数不同程度下降，且野茼蒿高剂量组的DAI评分比中低剂量组下降较显着，炎症程度也较轻；TNF-α、IL-6、IL-8水平下降，且剂量越高，下降越显着， IL-10水平上升，剂量越高，上升越多，与模型组比较有计算学含义（P<0.05或P<0.01）。跟着野茼蒿剂量的添加，UC大鼠的炎症情况逐步得到改进，标明野茼蒿对UC的医治是有效果的，其机制可能是经过下降血清中促炎细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α水平，升高血清中抗炎细胞因子IL-10水平，来减轻UC大鼠的炎症反响，起维护肠黏膜的效果。
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（收稿日期：2017-05-05 本文修改：许俊琴）endprint
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