钟胜英
[摘要]意图 对ABO疑问血型判定中使用PCR-SSP法的临床价值进行评论。办法 选取2015年1月～2016年12月我院收治的225例ABO疑问血型受试者，别离给予PCR-SSP法和血清学定型办法进行检测，比照相关数据差异。成果 PCR-SSP法与血清学定型办法的检测成果比较，差异均有统计学含义（P<0.05）。定论 PCR-SSP法在ABO疑问血型判定中临床使用价值高，值得临床输血工作者注重。
[关键词]ABO血型；血清学定型；聚合酶链反响-序列特异性引物法
[中图分类号] R457.11 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）07（c）-0113-03
Application of PCR-SSP method in the identification of suspicious ABO blood group
ZHONG Sheng-ying
Department of Blood Transfusion，Xingning People′s Hospital of Guangdong Province，Xingning 514500，China
[Abstract]Objective To explore the clinical value of PCR-SSP in the identification of suspicious ABO blood group.Methods 225 cases of suspicious ABO blood type subjects admitted by our hospital from January 2015 to December 2016 were selected and respectively tested by the PCR-SSP and serological typing methods.The relevant data differences were compared.Results The results of PCR-SSP and serological typing methods were compared and the differences were statistically significant （P<0.05）.Conclusion The PCR-SSP method has high clinical value in the identification of suspicious ABO blood group and it is worth the attention of clinical transfusion workers.
[Key words]ABO blood group；Serological typing；PCR-SSP
早在1900年ABO血型系統关于临床输血医治进程中所具有的重要指导含义就现已被发现，并得到广泛性的认可。ABO血型的规范血清学正反定型办法，在实践使用进程中因为其具有操作办法、简略、有用的特色，在临床上被广泛使用。可是，需求留意的是，血清学试验的局限性现已被发现，它受生理学、病理学等许多要素影响的可能性较大，使正反定型不符状况发作[1]。近几年经很多研讨与实践证明，基因分型手法，在某一程度上可以充分地战胜血清学试验在实践使用中所具有的上述缺点，其作为血清学补偿办法之一，为临床输血医治、亲子判定、个别辨认供给了依据[2]。本次研讨中，笔者以225例ABO疑问血型受试者作为查询目标，剖析评论ABO疑问血型判定中使用聚合酶链反响-序列特异性引物法（PCR-SSP）的临床价值，现报导如下。
1材料与办法
1.1一般材料
选取2015年1月～2016年12月我院收治的225例ABO疑问血型受试者作为研讨目标，其间男性117例，女人108例；年纪6个月～78岁，均匀（45.6±10.3）岁；均契合ABO疑问血型受试者确诊规范；研讨经我院医学道德委员会审阅及赞同；自己或家族均知晓本研讨状况并签署赞同书；扫除存在血液系统疾病者，依从性较差者，罹患系统性疾病者。
1.2研讨办法
血清学：挑选红细胞、抗A、抗B规范血清、ABO试剂红细胞、谱细胞均由上海市血液中心供给。抗体挑选以及抗体判定采纳直接抗人球法，ABO血型判定经试管法盐水正反定型。
DNA经盐酸胍提取。盐酸胍溶液可以对细胞发作必定的裂解作用，使蛋白质在短时刻内发作变性，使DNA与硅胶模之间的结合速度加速，经过清洗、洗脱等处理之后，可以终究取得相应的DNA。
选用PCR-SSP法检测，PCR反响系统10 μl，其间0.1 μl Taq酶（5 U/μl），0.9 μl DNA（30 ng/μl），9 μl dNTP-Buffer工作液。PCR扩增，挑选美国PE9700型PCR扩增仪，扩增的基本条件设定为：96℃ 2 min；96℃ 20 s，68℃ 60 s，循环5次；96℃ 20 s，65℃ 45 s，72℃ 30 s，循环10次；96℃ 20 s，62℃ 45 s，72℃ 30 s，循环15次；72℃ 3 min；4℃条件下进行保存。PCR扩增产品检测：将PCR反响产品转移至2.5%琼脂榶凝胶孔中，在140～150 V的条件下，施行电泳处理，处理时刻操控在15～20 min，查询结构，判别有无特异性条带，与成果分型表进行比对之后得出详细的血型检测成果。
1.3查询目标
查询比照经PCR-SSP法与血清学定型办法检测出的成果差异。
1.4统计学办法
选用SPSS 20.0统计学软件对两种办法血清学定型检测成果差异进行数据剖析，计数材料用率表明，组间比较选用χ2查验，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
选用血清学办法，定型成果为A型的受试者63例；选用PCR-SSP法，受试者的详细基因型成果为：A1O1型42例，A1O2型48例，A2O1型12例，A2O1型15例，A1A2型6例，A1A1型3例。两种办法比较，差异有统计学含义（χ2=13.021，P=0.000）；选用血清学办法，定型成果为B型的受试者66例；选用PCR-SSP法，受试者的详细基因型成果为：BO1型15例，BO2型21例，BB型9例。两种办法比较，差异有统计学含义（χ2=7.854，P=0.002）；选用血清学办法，定型成果为O型的受试者12例；选用PCR-SSP法，受试者的详细基因型成果为：O1O1型3例，O1O2型0例。两种办法比较，差异有统计学含义（χ2=4.672，P=0.043）。选用血清学办法，定型成果为AB型的受试者84例；选用PCR-SSP法，受试者的详细基因型成果为：A1B型27例，A2B型24例。两种办法比较，差异有统计学含义（χ2=11.304，P=0.000）。
3评论
输血前标本收集的正确性、规范化操作是确保ABO血型判定成果精确性、输血安全有用的根本确保。血液标本会遭到生理、病理、收集、医治等许多要素的影响，进而形成ABO血型判定呈现困难[3]。
ABO疑问血型多表现出以下几点：①正定型与反定型成果不符；②弱凝聚，+/-判别困难；③血型“改动”，两次定型的成果不符；④与ABO“同型血”，穿插配血不匹配；⑤与ABO“同型血”穿插配血“相合”，在输血进程中却发作了输血反响；⑥与ABO“同型血”穿插配血相合，在输血进程中无反响，可是Hb升高值并未到达预期作用[4-7]。曾有学者指出，针对疑问血型标本，进一步打开不规则抗体筛查、吸收放散、唾液血型物质凝聚按捺试验的含义严重，经上述手法多可以对立-M、抗-P1以及非特异性冷凝聚等意外抗体发作ABO血型判定困难等许多问题[8-9]。遇到特殊状况，譬如说红细胞被本身抗体致敏、ABO亚型、表型被疾病等要素搅扰等在使用血清学办法的检测血型成果呈现困难时，打开分子生物学基因分型检测，能夠对血型判别供给牢靠的参阅依据，为一项不可或缺的辅佐手法，现在现已引起人们的注重。近期有学者指出，对ABO疑问血型进行判定的进程中，在传统血清学判定技能根底上，与ABO基因分型检测技能相结合，可以快速、简洁、精确地对疑问ABO血型进行判定，而且不会遭到本身抗体的搅扰，不需求重复采纳，无家系查询必要，可不考虑是否是排泄型，可以顺畅处理疑问血型判定等问题，对传统血清学判定技能的缺点有补偿作用，值得注重[10-12]。
相关范畴近年来所进行的研讨成果证明，选用血清学办法对ABO血型进行判定的进程中，首要使用血型抗原和抗体，针对实践工作中所遇到的一些疑问的血型判定者，可以依据实践状况适当地添加进行吸收放散试验、唾液定型检测等，抗原、抗体在不同亚型或一些疾病中，通常状况下会表现出必定的强化状况，使血型判别的难度添加，使成果判别具有较大主观性，且判定成果还有可能遭到试剂质量的影响。经研讨与实践证明，DNA不会遭到以上要素的影响，试验显现，ABO基因座位由7个外显子组成，其间第4、7外显子编码的氨基酸序列对A、B转移酶特异性发作了决定性作用，现在为止，现已发现的ABO亚型基因序列到达30种以上，具有序列多态性的等位基因构成了ABO血型分子生物学分型的根底[13-15]。
曾有文献报导，形成ABO血型判定不相符的影响要素包含：①血型判定技能要素。定性试剂血清失效，或者是红细胞悬液、试剂血清、盐水被细菌污染，或者是加血标本的进程中发作穿插污染，技能人员并没有严厉的依照操作规程打开相应试验，如：试管中未加入定型试剂血清，加错血标本；患者红细胞悬液浓度过低；离心操作时刻过短；没有进行反定型，仅经过肉眼对成果进行查询；在血型抗原性削弱的状况下，弱小细微凝聚并未被发现；试管没有进行符号，在离心完成后，试管拿错，形成破绽百呈现象的发作；没有正确对血型判定成果进行解说和记载，将ABO定型试剂血清的“抗A或者是抗B血清”被误认为是A型或者是B型血清，并未认识到在试验进程中，溶血现象同样是阳性反响，进而形成成果判别失误。②患者血清或者是红细胞要素。血型抗体削弱或缺少会形成ABO血型正反定型不符状况，如：晚年人群的血清抗体效价相对较低，新生儿的血清中ABO抗体一般呈现为阴性或者是很弱，因而，多不会对婴儿打开ABO反定型。关于白血病患者而言，其多兼并低病种球蛋白血症，淋巴瘤患者会兼并呈现低丙种球蛋白血症，免疫按捺剂的使用会形成低丙种球蛋白血症的呈现，一些免疫缺点患者，血清中ABO抗体与红细胞抗原不一致，因而会对血型判定成果发作影响。曾有研讨指出，红细胞抗原性削弱或者是缺少会形成ABO血型正反定型不符状况发作，譬如说A或者是B亚型。白血病患者以及一些恶性肿瘤患者的红细胞A或者是B抗原性削弱[16]。
选用PCR-SSP技能对ABO血型的详细基因型状况进行监测，首要是使用ABO基因中所存在的突变位点上，所带着的核苷酸具有必定的差异性，规划一序列具有较强特异性的引物，对ABO血型基因的DNA片段进行直接的扩增处理，对ABO血型以及亚型进行检测。本次研讨发现，相关于血清学办法，PCR-SSP可以使血清学判定只能判定表现型的局限性得到战胜，研讨成果提示，PCR-SSP法与血清学定型办法的检测成果比较，差异有统计学含义（P<0.05），这一成果与相关文献[17-18]报导成果类似。
综上所述，PCR-SSP法在ABO疑问血型判定中的使用价值较高，在临床输血工作中可对其给予广泛使用，不只可以清晰ABO血型，还能精确确诊A1O1、A1O2、A2O1、A2O2、A1A2、A1A1、BO1、BO2、BB、O1O1、 O1O2、A1B、A2B等散布状况，经基因查验均可以对血型进行断定，同型输血作用较为抱负。
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（收稿日期：2017-05-11 本文修改：任 念）
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