张益明++赵茂森 朱仁武 顾叶春
[摘要] 意图 评论存活素（Survivin）、神经纤维网蛋白1（NRP1）在胃癌中的表达及其对胃癌预后的影响。 办法 使用免疫组化法测定60例胃癌安排及60例正常胃黏膜安排中Survivin、NRP1表达状况，使用Kaplan-Meier核算Survivin阳性、NRP1阳性患者5年生存率，以Cox风险模型剖析影响胃癌患者预后的风险要素。 成果 胃癌安排中Survivin阳性表达率为86.67%，NRP1阳性表达率为83.33%，而在胃正常黏膜安排中的表达分别为6.67%、5.00%，差异有统计学含义（P<0.05）。Survivin阳性表达率与TNM分期、累及浆膜层、滋润深度、淋巴结搬运有关（P<0.05）。NRP1阳性表达率与TNM分期、滋润深度及淋巴结搬运有关（P<0.05）。60例胃癌患者术后随访5年，共56例取得随访，5年存活为25例，5年存活率为44.64%，其间Survivin阳性存活率35.42%（17/56），NRP1阳性存活率为32.61%（15/56）。经Cox风险剖析可知，Survivin阳性、NRP1阳性是影响胃癌预后的独立风险要素。 定论Survivin、NRP1可能与胃癌发作及发展相关。Survivin、NRP1表达状况是胃癌预后的独立猜测要素，其阳性表达可提示患者预后不良。
[关键词] 存活素；神经纤维网蛋白；胃癌；预后
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）25-0008-04
The impact of Survivin， NRP1 in gastric cancer and its prognosis of gastric cancer
ZHANG Yiming ZHAO Maosen ZHU Renwu GU Yechun
Department of General Surgery， Wenzhou Hospital of Interated Traditional Chinese and Werstern Medicine in Zhejiang Province， Wenzhou 325001， China
[Abstract] Objective To investigate the expression of Survivin， nerve fiber web protein 1（NRP1）in gastric and its impact on the prognosis of gastric. Methods The Survivin， NRP1 of 60 cases of gastric cancer and 60 cases of normal gastric mucosa were detected with immunohistochemistry method. The 5-year survival rate of Survivin positive， NRP1 positive were applicated with Kaplan-Meier.The risk factors of patients with gastric cancer were analyzed with Cox hazard regression model. Results Survivin expression in gastric cancer was 86.67%， NRP1 positive rate was 83.33%， while expression in normal gastric mucosa were 6.67%， 5.00%（P<0.05）. Survivin expression rate was related with TNM stage， involving the serosa， depth of invasion and lymph node metastasis（P<0.05）. NRP1 positive expression rate was related with TNM stage， depth of invasion and lymph node metastasis（P<0.05）. 60 gastric cancer patients were followed up for 5 years， 56 patients were followed up， 5-year survival of 25 cases， 5-year survival rate was 44.64%， which Survivin positive survival rate 35.42%（17/56）， NRP1 positive survival rate was 32.61%（15/56）. Survivin positive， NRP1 positives were independent risk factors for gastric cancer prognosis with Cox risk analysis. Conclusion Survivin， NRP1 may occur with gastric cancer and related progress. Survivin， NRP1 expression status is an independent predictor of prognosis of gastric cancer， and its expression may indicate a poor prognosis.
[Key words] Survivin； Neuropil protein； Gastric cancer； Prognosis
胃癌的逝世率居我国恶性肿瘤的首位，癌细胞侵袭及搬运是导致胃癌逝世的重要要素之一，因而对影响胃癌侵袭及搬运的相关要素进行剖析对猜测胃癌预后具有重要的含义[1-2]。近年来研讨指出[3]，经过检测胃癌相关蛋白凋亡及表达状况对猜测胃癌侵袭及搬运具有必定的效果。存活素（Survivin）属凋亡按捺因子IAPs宗族中一员，具有广谱恶性肿瘤表达特效。Survivin蛋白表达与多种恶性肿瘤侵袭、搬运及预后有关[4-5]。神经纤维网蛋白1（NRP1）是血管内皮生长因子（VEGF）新式的受体，在多种恶性肿瘤细胞中均为高表达，且参加恶性肿瘤发作及发展进程[6-7]。本研讨使用免疫安排化学法检测胃癌安排Survivin、NRP1表达状况，并结合临床病理特征，评论Survivin、NRP1表达与胃癌侵袭、搬运及预后的联系，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 临床材料
搜集2010年6月～2011年6月本院普外科胃癌彻底治愈手术60例患者的临床材料，患者术前均未接受过放化疗医治，其间男35例，女25例，年纪48～74岁，均匀（56.8±2.2）岁。肿瘤直径< 5 cm 22例，≥5 cm 38例，累及浆膜层 35例，低分解腺癌30例，中高分解腺癌30例。TNM分期：Ⅰ期 20例，Ⅱ期18例，Ⅲ期 14例，Ⅳ期 8例。淋巴结搬运28例，无淋巴结搬运 32例。肿瘤滋润：T1～T2 32例，T3 28例。病理安排的临床分类参照WHO胃癌临床病理学分类，每份病理标本均留取肿瘤安排及距肿瘤5 cm以上的正常胃黏膜安排，病理安排离体后敏捷将其置于液氮中保存以便行病理安排学剖析。
1.2 免疫安排化学法
使用免疫组化法测定Survivin、NRP1蛋白表达，Survivin鼠抗人单克隆抗体购于Sigma公司，NRP1鼠抗人单克隆抗体购于NeoMarkers公司，Survivin试剂盒购于上海酶联实业有限公司，NRP1试剂盒购于上海钰博生物科技有限公司。染色进程详细如下：将胃癌安排及正常胃黏膜安排标本蜡块切成4 μm厚切片，常温下乙醇梯度脱水，二甲苯脱蜡，使用3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，选用0.01 mol/L磷酸缓冲液冲刷标本2次，常温下使用正常羊血清工作液关闭样本10 min，顺次参加Survivin鼠抗人单克隆抗体及NRP1鼠抗人单克隆抗体，选用磷酸缓冲液冲刷标本2次，参加辣根过氧化物酶符号的链霉素工作液，于37℃恒温培养箱中（类型：DNP-9022；上海精宏试验设备有限公司）孵育25 min，经磷酸缓冲液冲刷后，经DAB染色，苏木素复染，选用中性树胶封固。
成果断定参阅相关文献[8]：胞浆内出现棕黄色为Survivin阳性，出现红褐色荧光为NRP1阳性。依据染色深度及染色面积进行计分，Survivin染色深度评分：0分为无显色或显色不清，1分为浅黄色，2分为深黄色，3分为褐黄色。染色面积：0分：0%～5%，1分：>5%～35%，2分：>35%～65%，3分：>65%。染色深度与面积之和≥1分则为Survivin免疫组化法染色阳性。NRP1染色深度评分：0分为无显色或显色不清，1分为浅赤色，2分为深赤色，3分为红褐色。染色面积：0分：0%～5%，1分：>5%～35%，2分：>35%～65%，3分：>65%。染色深度与面积之和≥1分则为NRP1免疫组化法染色阳性。
1.3 统计学办法
选用SPSS19.0对数据进行剖析，计量材料用均数±标准差（x±s）标明，选用t查验，计数材料用率标明，选用χ2查验，使用Kaplan-Meier核算生存率，影响胃癌术后预后的风险要素使用Cox回归剖析，P<0.05为差异具有统计学含义。
2 成果
2.1 Survivin、NRP1在胃癌安排及正常胃黏膜安排中的表达
胃癌安排中Survivin阳性表达率为86.67%，NRP1阳性表达率为83.33%，而在胃正常黏膜安排中的表达分别为6.67%、5.00%，差异有统计学含义（P<0.05）。
2.2 Survivin、NRP1表达与胃癌安排临床特征的联系
Survivin阳性表达率与TNM分期、累及浆膜层、滋润深度、淋巴结搬运有关（P<0.05）。NRP1阳性表达率与TNM分期、滋润深度及淋巴结搬运有关（P<0.05）。
2.3 Survivin、NRP1阳性患者预后要素剖析
60例胃癌患者术后随访5年，共56例取得随访，5年存活为25例，5年存活率为44.64%，其间Survivin阳性存活率35.42%（17/56），NRP1阳性存活率32.61%（15/56）。肿瘤直径、累及浆膜层、滋润深度、TNM分期、淋巴结搬运、Survivin阳性、NRP1阳性与胃癌5年生存率明显相关（P<0.05）。
2.4 影响胃癌术后生存率的Cox多要素剖析
经Cox多要素剖析，患者临床分期、淋巴结搬运、Survivin阳性、NRP1阳性是影响胃癌远期预后的独立风险要素。
3 评论
Survivin是现在发现最强的凋亡按捺因子，具有调理细胞有丝割裂及按捺细胞凋亡的两层效果。很多研讨发现[9-12]，Survivin与恶性肿瘤发作及发展有亲近的联系，Survivin不仅能按捺凋亡蛋白酶活性，阻断凋亡信号传导，并且能在细胞有丝割裂前期特异性结合纺锤体微管导致肿瘤细胞反常割裂及增殖。孙娟等[13]研讨指出Survivin在所有能被检测的恶性肿瘤安排中均有不同程度的表达，且与多种肿瘤生物学特征有亲近的联系。Cheng等[14]研讨指出，Survivin在胃癌安排中阳性表达率为85.2%，且Survivin阳性表达与胃癌侵袭、搬运及淋巴管滋润有亲近的联系。本研讨使用免疫组化法测定胃癌安排中Survivin表达状况，成果显现，60例胃癌安排患者中Survivin阳性表达率为86.67%，而在胃正常黏膜安排中的表达分别为6.67%，差异有统计学含义（P<0.05），且Survivin阳性表达率与TNM分期、累及浆膜层、滋润深度、淋巴结搬运有关，因而经过检测胃癌安排中Survivin表达能有用判别胃癌发作及发展状况。本研讨发现，Survivin表达与临床分期、淋巴结搬运等传统病理学目标相同，是影响胃癌术后5年生存率的独立风险要素，因而，作为TNM及淋巴结搬运的弥补，可将Survivin阳性表达作为判别胃癌预后的有价值目标之一。
NRP1在肿瘤发作及病况发展中的效果机制非常复杂[15]。Shahrabi等[16]发现NRP1除了在肿瘤细胞中表达外，还可在血管内皮细胞中表达，然后提示NRP1可能在这两个方位发挥效果。在内皮细胞中，NRP1作为受体，可与VEGF结合，并添加其活性，然后增强VEGF诱导血管内皮细胞有丝割裂及细胞趋化性，进而促进肿瘤血管生成[17]。研讨发现[18]，部分肿瘤细胞中无VEGF表达，因而NRP1在肿瘤细胞中可经过信号传导途径或与VEGF结合构成相关配体然后完成肿瘤的侵袭及搬运进程。Talagas等[19]也发现，非小细胞肺癌患者肿瘤细胞中NRP1可经过调控P13K/AKT信号通路及上调VEGF表达水对等途径一起影响肺癌的远期预后。Shahrabi等[20]研讨指出，NRP1表达与肿瘤细胞微血管生成及VEGF表达水平上调有亲近的联系。本研讨成果显现，正常胃黏膜安排中NRP1水平明显低于胃癌安排，NRP1水平与胃癌NRP1mRNA表达量与淋巴结搬运、TNM分期等临床特征有关，标明NRP1高表达水平可促进肿瘤微血管生成并与胃癌侵袭及搬运等生物学行为联系亲近，经过测定胃癌安排中NRP1表达可判别胃癌侵袭性及搬运性。此外，本研讨经Cox风险模型剖析显现，NRP1阳性表达是影响胃癌患者术后预后的独立风险因子，可作为点评胃癌病况发作、发展及预后的猜测目标。
综上所述，Survivin、NRP1可能与胃癌发作及发展亲近相关。Survivin、NRP1表达状况是胃癌预后的独立猜测要素，其阳性表达可提示患者预后不良。
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（收稿日期：2016-07-01）
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