甘曙光+胡吉迪+曹越
[摘要]意图 树立神农镇痛膏中士的宁的含量测定办法，并拟定其定量规范。办法 选用C18色谱柱，活动相为A相（乙腈）∶B相（0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L KH2PO4等量混合溶液，用10% H3PO4调理pH值到2.8）=21∶79，流速为1.0 ml/min，柱温为30℃，检测波长为260 nm。成果 线性规模为54.048～2026.8 ng，r=0.9996，本办法的重复性和精细度杰出（RSD<2.0%），其定量拟定为每100平方厘米含马钱子以士的宁（C21H22N2O2）计为0.20～1.00 mg。定论 本办法简洁、精确、重复性好，可用于神农镇痛膏中士的宁的含量测定，其定量客观合理，确保了用药的安全有用。
[关键词]神农镇痛膏；士的宁；高效液相色谱法；含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）05（c）-0093-04
[Abstract]Objective To establish a content determination method of Strychnine in Shengnong Zhengtong Paste，and to set its limited quantity standard.Methods C18 chromatographic column was used， and the mobile phase was phase A （acetonitrile）∶phase B （0.01 mol/L heptane sodium sulfonate and 0.02 mol/L KH2PO4 of equal mixing solution，with 10% H3PO4 to adjust pH value to 2.8） =21∶79.The flow rate was 1.0 ml/min，the column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was 260 nm.Results The linear range was 54.048-2026.8 ng，r=0.9996，and the reproducibility and precision of this method was good （RSD<2.0%）.The limited quantity scheduled having maqianzi of 0.20-1.00 mg every 100 square centimeters calculating with Strychnine （C21H22N2O2）.Conclusion The method is simple，accurate and reproducible.It can be used for the determination of Strychnine in Shengnong Zhengtong Paste.Its limited quantity is objective and rational to ensure the safety of drug use.
[Key words]Shengnong Zhengtong Paste；Strychnine；High performance liquid chromatography；Content determination
神农镇痛膏的首要成分有三七、土鱉虫，这些具有活血化瘀，通经络之成效，乳香、川芎、红花、当归等成分对主药的成效起到加强效果；防风、马钱子、白芷具有祛风散寒的效果，龙脑可以消肿止痛[1-2]。该产品能活性散瘀、消肿止痛[3-6]。马钱子为马钱科植物马钱（Strychnos nux-vomica L.）的枯燥老练种子，具有通络止痛，散结消肿的成效。用于风湿顽痹，麻痹瘫痪，跌扑损害，痈疽胀痛，小儿麻痹后遗症，类风湿性关节痛的医治[7-8]。但其性味苦，有大毒[1]，须对其用量进行操控。马钱子首要成分为士的宁[9-12]，本文参阅《我国药典》2010年版一部及相关文献[13-15]，以士的宁作为目标，树立检测办法，进行了可行性研讨，依据成果树立士的宁的检测办法，经过样品与参照药比照研讨，拟定了操控规模，并进一步有用操控马钱子的用量，确保用药安全有用。
1 仪器与试药
安捷伦HP1100高效液相色谱仪；岛津SHIMADZU LC-20AT高效液相色谱仪；WelchromTM C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Agilent C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；KQ2200超声波仪（昆山市超声仪器有限公司）；士的宁（中检所供给，含量测定级，批号：110705-200306）；神农镇痛膏样品（黄石燕舞药业有限公司，规范为：9.5 cm×11.6 cm，20091101、20091102、20091103）；神农镇痛膏参照药（广东湛江吉民药业，规范：9.5 cm×11.6 cm，20081001、20081002）；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为剖析纯。
2 办法与成果
2.1 溶液的制备
2.1.1 供试品溶液的制备 取神农镇痛膏样品1片，除掉盖衬，半数，剪碎，置于锥形瓶中，参加二氯甲烷50 ml，参加浓氨试液1 ml，超声提取30 min（100 W，50 kHz），冷却至室温，倾出二氯甲烷液，用适量二氯甲烷洗刷锥形瓶。兼并二氯甲烷液，用稀硫酸溶液萃取3次（60、60、50 ml），兼并硫酸液，加浓氨试液调理pH至9～10，用二氯甲烷提取3次（60、60、50 ml），兼并，收回二氯甲烷至干，残渣加甲醇复溶，置10 ml容量瓶中，加甲醇稀释到刻度，混匀，过滤，即得。
2.1.2对照品溶液的制备
取士的宁对照品适量，精细称定，制成每毫升含40 μg/ml的甲醇溶液。
2.1.3 阴性对照溶液的制备
取阴性对照样品（无马钱子），照2.1制备，即得。
2.2 色谱条件的树立
2.2.1检测波长的挑选
取士的宁对照品溶液进行扫描（λ：190～800 nm），成果在255 nm邻近有最大吸收，参照《我国药典》2010年版一部，断定波长为260 nm。
2.2.2活动相的挑选
参照《我国药典》2010年版一部及文献，活动相为A相（乙腈）∶B相（0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L KH2PO4等量混合溶液，用10%H3PO4调理pH值到2.8）=21∶79，成果显现主成分峰与其他峰能彻底别离，保存时刻恰当。
2.3 办法学研讨
2.3.1 专特点试验
别离取2.1.1供试品溶液、2.1.2对照品溶液、2.1.3项阴性对照溶液，各进样10 μl，记载色谱图，成果标明士的宁的保存时刻为17.8 min左右，保存时刻适中，即可以有用别离主成分，又能统筹工作效率。阴性样品（缺马钱子）在此方位没有色谱峰，样品中杂质与主成分峰别离杰出。一起用DAD检测器别离对样品和对照品中的主成分峰进行峰纯度查看，峰纯度的match值为999.81，标明峰纯度很好，即色谱峰中只含有1种组分（图1～5）。
2.3.2 线性关系调查
制造浓度为5.4048、10.87、21.6192、48.6432、90.08、135.12、202.68 μg/ml的士的宁对照品溶液，进样10 μl，以峰面积A对进样量进行线性回归。成果标明，士的宁的进样量在54.048～2026.8 ng规模内时，Y=2.0156X+29.032（Y=峰面积，X=进样量，r=0.9996），该项成果标明，选用该色谱条件，检测的灵敏度较高，线性规模较宽，且线性关系杰出。
2.3.3 重复性试验
取神农镇痛膏样品6份，依照上述办法进行检测，测定含量=0.51±0.00（n=6），RSD为0.16%。成果标明该办法具有较好的重复性。
2.3.4 精确度试验
选用加样收回的办法进行调查，取已知含量的样品（含量0.51mg/片）6份，别离参加浓度为198.66 μg/ml士的宁对照品溶液2 ml，依照上述办法检测，依据参加的量和测得的量核算收回率，均匀收回率为98.5%，RSD为0.4%。成果标明，本法收回率杰出，专确度较高。
2.3.5 耐用性试验
2.3.5.1色谱柱的影响 调查了2种产品规范的色谱柱，取同一供试品溶液及对照品溶液进行检测。含量测定成果共同（表1），2种产品规范的色谱柱均能到达较好的别离度。
2.3.5.2仪器的影响 选用2种不同的高效液相色谱仪，取同一供试品溶液及对照品溶液进行检测。含量测定成果共同（表2），选用2种不同的仪器均能到达较好的别离度。
2.3.5.3样品溶液的安稳性调查 取神农镇痛膏样品，依照上述办法操作，在不同的时刻点进样检测，峰面积=984.76±0.39（n=6），RSD为0.04%，成果标明，供试品在12 h内安稳，可以满意样品检测的需求。
该项成果显现，在运用不同的色谱柱，或许运用不同的仪器进行检测，测得的成果根本共同，且供试品溶液安稳性较好，标明该办法具有较好的耐用性。
2.4 含量极限的拟定
选用以上检测办法，对11批次的神农镇痛膏样品及参照药别离测定含量，成果见表3。
归纳样品含量测定的成果，考虑厂家实践出产状况，含量极限按以上11批样品的含量散布状况拟定，依据神农镇痛膏的规范9.5 cm×11.6 cm与新添加的规范7 cm×10 cm两者面积巨细的不同，按膏药片的面积核算，神农镇痛膏中马钱子中士的宁的定量检测暂拟订为：本品每100平方厘米含马钱子以士的宁（C21H22N2O2）核算为0.20～1.00 mg。
3 评论
马钱子药用历史悠久，具有振奋中枢神经、镇痛抗炎、抗血栓、强心、改进血液微循环等药理效果。其味苦，性温，有大毒。马钱子首要含生物碱类、苷类、酸类、醇类等化学成分[9-10]，其间含生物碱1.5%～5%，生物碱类首要成分为士的宁，其首要成分既是有用成分也是毒性成分。故以士的宁为检测目标[7]。
选用本文所树立的办法，峰形对称且安稳，和相邻杂质峰别离较好，空白溶剂和空白辅料对本法无搅扰，选用不同色谱柱和不同仪器测定，含量测定成果共同，均能到达试验要求，标明体系适用性较好。本法简洁、精确、重现性好，样品溶液安稳，可作为神农镇痛膏中士的宁含量测定办法。所断定的操控规范在确保用药安全有用的前提下，参阅了相同种类的水平，也统筹到了出产实践，是的确可行的。
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（收稿日期：2017-04-01 本文修改：许俊琴）
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