陈育华++周碧云++梁斯锶++吴显劲++李海燕
[摘要]意图 了解來我院就诊的地中海贫血（简称“地贫”）筛查患者地贫基因类型并剖析均匀红细胞体积（MCV）、均匀红细胞血红蛋白含量（MCH）在地贫筛查中的使用价值。办法 对2015年12月～2016年9月来我院就诊的1071例地贫筛查患者选用裂口PCR（gap-PCR）扩增法检测α地贫基因以及PCR-反向斑点杂交（PCR-RDB）技能检测β地贫基因，血细胞剖析仪剖析904例患者外周血的MCV、MCH。成果 ①1071例检测样本中男性556例，检出地贫230例（41.37%）；女人515例，检出地贫238例（46.21%），不同性别组检测阳性差异无计算学含义（χ2=2.55，P>0.05）。②儿童组（0～16岁）360例，检出地贫174例（48.33%）；青壮年组（17～49岁）651例，检出地贫278例（42.7%）；晚年组（≥50岁）60例，检出地贫16例（26.67%），不同年纪组检测阳性差异有计算学含义（χ2=10.48，P<0.01）。③1071例样本共检测α地贫293例（27.36%），其间以αα/--SEA、-α3.7/αα、αα/-α4.2基因型为主，占α地贫的93.86%；检测β地贫157例（14.66%），其间以CD41-42、IVS-Ⅱ-654、-28、CD71-72、CD17基因型为主，占β地贫的82.81%；α地贫复合β地贫18例，份额为1.68%。④MCV用于α地贫、β地贫和αβ复合型地贫的筛查的灵敏度分别为91.18%、99.21%、92.31%，特异度为54.18%；MCH用于α地贫组、β地贫组和αβ复合型地贫组的筛查的灵敏度分别为94.12%、99.21%、100.00%，特异度为51.90%；MCV+MCH用于α地贫组、β地贫组和αβ复合型地贫组的筛查的灵敏度分别为89.08%、99.21%、84.62%，特异度为49.24%；MCV与MCH的灵敏度差异无计算学含义（χ2=1.77，P>0.05），特异度差异无计算学含义（χ2=0.55，P>0.05）。定论 1071例地贫患者中α地贫中以αα/--SEA基因型最为常见，β地贫中以βCD41-42基因型最为常见，在地贫筛查中，MCV+MCH用于筛查作用好。
[关键词]α地中海贫血；β地中海贫血；均匀红细胞体积；均匀红细胞血红蛋白含量
[中图分类号] R556.71 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）04（c）-0159-05
[Abstract]Objective To investigate the genetic heterogeneity of thalassemin of patients in our hospital
and the diagnostic value of mean corpuscular volume（MCV） and mean corpuscular hemoglobin （MCH）in thalassemia screening.Methods From December 2015 to September 2016，1071 patients with thalassemia in our hospital were selected，gap-PCR and polymerase chain reaction-reverse dot blot （PCR-RDB） were used to test α-thalassemia gene and β-thalassemia gene，hematology analyzer was used to test mean corpuscular volume （MCV） and mean corpuscular hemoglobin （MCH） of 904 patients.Results ①Among the 1071 cases，556 cases was male and 515 cases was female，the positive rate of thalassemia was 41.37%（230 cases） for male and 46.21%（238 cases） for female，which was displayed no statistical differences in the two groups （χ2=2.55，P>0.05）.②During different group such as children group （0-16 years old，360 cases），adult group （17-49 years old，651 cases） and senior group （≥ 50 years old，60 cases），the positive rate of thalassemia was 48.33%（174 cases），42.7%（278 cases） and 26.67%（16 cases），respectively，which was displayed statistical differences among the groups （χ2=10.48，P<0.01）.③among 1071specimens，293 cases （27.36%） were diagnosed as α-thalassemia and 157 cases （14.66%） were diagnosed as β-thalassemia.Among the α-thalassemia genotypes，αα/--SEA，-α3.7/αα，αα/-α4.2 were the most common genotypes （93.86%）；among the β-thalassemia genotypes，CD41-42，IVS-Ⅱ-654，-28，CD71-72，CD17 were the most common genotypes （82.81%）；18 cases （1.68%） were diagnosed as α- thalassemia combined with β-thalassemia.④The diagnostic sensitivity of MCV for α-thalassemia，β-thalassemia and αβ-thalassemia screening were 91.18%，99.21% and 92.31%，respectively，and 54.18% for the diagnostic specificity.The diagnostic sensitivity of MCH for α-thalassemia，β-thalassemia and αβ-thalassemia screening were 94.12%，99.21% and 100.00%，respectively，and 51.90% for the diagnostic specificity.The diagnostic sensitivity of MCV+MCH for α-thalassemia，β-thalassemia and αβ-thalassemia screening were 89.08%，99.21% and 84.62%，respectively，and 49.24%% for the diagnostic specificity.There was no significant difference in the sensitivity and specificity between MCV and MCH （χ2=1.77，P>0.05；χ2=0.55，P>0.05）.Conclusion αα/-SEA genotype and βCD41-42 genotype are the most common type in α-thalassemia and β-thalassemia in 1071 patients with thalassemia，it is reasonable to screening the thalassemia by MCV combine with MCH.
[Key words]α-thalassemia；β-thalassemia；Mean corpuscular volume；Mean corpuscular hemoglobin
地中海贫血（简称“地贫”）又称海洋性贫血或珠蛋白组成妨碍性贫血，是一种常染色体隐性的单基因遗传病[1]。因为珠蛋白基因缺点导致血红蛋白中的珠蛋白肽链组成削减或不能组成，使得血红蛋白的组分和含量发作改动，影响到红细胞的携氧才能，然后导致不同程度的溶血，使患者发作贫血，其间以α和β地贫较为常见[2]。据WHO估量，世界人口约有4.5%的人群带着有地贫基因[3]，在我国首要会集在长江以南的福建、江西、湖南、广东、广西、海南、重庆、四川、贵州、云南等省（市、自治区），特别以两广区域最为严峻。广东地贫基因带着者超越10%，广西地贫基因带着者超越20%，现在世界上还没有医治地贫的有用办法，所以防备地贫儿的出世尤为重要[4-9]。本研讨剖析来我院就诊的地贫筛查患者的地贫基因类型并剖析均匀红细胞体积（mean corpuscular volume，MCV）、均匀红细胞血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）在地贫筛查中的使用价值。
1目标与办法
1.1目标
挑选2015年12月～2016年9月于我院进行地贫基因检测的患者1071例，以MCV<80 fl和（或）MCH<27 pg者为筛查阳性，对筛查阳性患者再进行地贫基因检测。本研讨经医院医学道德委员会同意，参加研讨者均签属知情同意书。其间男性556例，女人515例；按年纪分为儿童组（1～16岁）360例，青壮年组（17～49岁）651例，晚年组（≥50岁）60例。
1.2仪器与试剂
血细胞剖析仪（LH750）为美国贝克曼库尔特公司产品，试剂为产家原装配套试剂。PCR扩增仪（Hema 9600）为贝登生物科技有限公司产品，地贫基因检测试剂盒由深圳亚能生物技能有限公司供给。
1.3检测办法
1.3.1血细胞剖析 用EDTA抗凝管抽取2 ml静脉血，直接将样本在血细胞剖析仪上检测，首要查询目标为均匀红细胞体积（MCV）、均匀红细胞血红蛋白含量（MCH）。
1.3.2地贫基因剖析 用EDTA抗凝管抽取3 ml静脉血，依照亚能生物公司核酸提取试剂盒说明书提取全血DNA。α地贫基因PCR扩增：取2 μl DNA参加反响管中（反响整体系为25 μl），先96℃加热5 min，然后98℃ 45 s，65℃ 90 s，72℃ 3 min共10个循环，再98℃ 30 s，65℃ 45 s，72℃ 3 min，共25个循环，最终72℃ 10 min。取PCR产品及示踪染料各1 μl混匀后，1.0%琼脂糖凝胶电泳60 min，电泳完毕后，将琼脂糖凝胶放入紫外透射剖析仪上查询α地贫缺失类型。β地贫基因PCR扩增：取2 μl DNA参加反响管中（反响整体系为25 μl），先50℃加热15 min，然后95℃加热10 min，再94℃ 1 min，55℃ 30 s，72℃ 30 s共35个循环，最终72℃ 10 min，将PCR产品与试剂盒膜条进行杂交，然后洗膜、显色，肉眼查询β地贫骤变位点类型。
1.3.3各目标的计算办法 真阳性者（TP）：初筛阳性而地贫基因阳性患者；假阳性者（FP）：初筛阳性而地贫基因阴性患者；真阴性者（TN）：初筛阴性而地贫基因阴性患者；假阴性者（FN）：初筛阴性而地贫基因阳性患者；灵敏度=[TP/（TP+FN）]×100%；特异度=[TN/（TN+FP）]×100%；阳性猜测值=[TP/（TP+FP）]×100%；阴性猜测值=[TN/（TN+FN）]×100%；准确度=[（TP+TN）/（TP+FP+TN+FN）]×100%。因为患者没有进行血红蛋白（Hb）电泳剖析，而MCV、MCH仅为地贫筛查的初级筛查目标，因而本次的特异度、阳性猜测值、阴性猜测值、准确度仅针对总的地贫基因筛查进行计算。
1.4计算学办法
选用SPSS 17.0计算学软件进行数据剖析，计数材料用率标明，组间比较选用χ2查验，以P<0.05为差异有计算学含义。
2成果
2.1 1071例地貧患者地贫基因型的散布状况
2.1.1 1071例检测样本中按性别和年纪分组的成果剖析 1071例检测样本中，男性检出地贫基因230例（41.37%），女人检出地贫基因238例（46.21%），男、女地贫基因检测阳性差异无计算学含义（χ2=2.55，P>0.05）；儿童组检出地贫基因174例（48.33%），青壮年组检出地贫基因278例（42.7%），晚年组检出地贫基因16例（26.67%），不同年纪组地贫基因检测阳性差异有计算学含义（χ2=10.48，P<0.01）。
2.1.2 1071例检测样本中按地贫基因类型的成果剖析 1071例检测样本中，确诊为α地贫293例（27.36%），包含5种基因亚型，其间以αα/--SEA（174例，59.39%）、-α3.7/αα（72例，24.57%）、αα/-α4.2（29例，9.90%）基因型为主，占整体α地贫的93.86%（表1）；确诊为β地贫157例（14.66%），包含15种基因亚型，其间以CD41-42（37.58%）、IVS-Ⅱ-654（22.30%）、-28（10.83%）、CD17（8.92%）、CD71-72（3.18%）基因型为主，占整体β地贫的82.81%（表2）；确诊为α地贫复合β地贫基因型18例（1.68%），包含11种复合基因亚型（表3）。
2.2 MCV、MCH在地贫筛查中的价值
本次确诊α地贫、β地贫以及α地贫复合β地贫分别为238、127、13例，未检出地贫基因526例。在三种地贫基因筛查阳性例数中，MCV阳性例数分别为217、126、12例，MCH阳性例数分别为224、126、13例，MCV+MCH阳性例数分别为212、126、11例，MCV、MCH、MCV+MCH三个目标在地贫基因筛查的灵敏度、特异度、阳性猜测值、阴性猜测值、准确度见表4。使用计算学软件进行剖析，MCV与MCH的灵敏度差异无计算学含义（χ2=1.77，P>0.05），特异度差异无计算学含义（χ2=0.55，P>0.05）。
3评论
地贫一旦发病，不只会给患者本身的身心健康带来严峻的损害，也会给社会及患者家庭带来沉重的精神负担和经济负担[10]。在地贫较为盛行的国家和地區，地贫已经成为一个严重的公共卫生问题。在现有的技能条件下，地贫一旦发作尚没有办法彻底治愈，只能依托标准的产前筛查和确诊，有用地防备和操控地贫的发作，及时发现可能出世的中重型地贫患儿并停止妊娠[2]。地贫检测的办法包含血液学进行初筛和基因确诊进行确诊[11]。血液学进行初筛，首要是经过血惯例目标血红蛋白含量、MCV、MCH等，结合血清铁检测和血红蛋白电泳剖析可开始筛查出地贫患者，基因确诊首要依托分子生物学手法检测基因的缺失及骤变[12]。
本研讨检测的1071例地贫患者中，检出地贫基因带着者468例，阳性率到达43.70%，反映出本区域是地贫的高发区，应加强本区域地贫的筛查和基因确诊以检出带着者，一起展开人群普查和遗传咨询、做好婚前辅导以防止地贫基因带着者之间联婚，这关于防备本病有重要含义。本次确诊为α地贫患者293例（27.36%），其间以αα/--SEA、-α3.7/αα、αα/-α4.2基因型为主，占整体α地贫的93.86%。其间以αα/--SEA（59.39%）占多数，其基因型与东莞、深圳、广州区域的基因型相同，与广东、广西、湖南、四川、江西等省人群中缺失型α地贫常见基因型相同[13-16]。别的β地贫检出157例（14.66%），以CD41-42（-TCTT）（37.58%）占多数，其次为IVS-Ⅱ-654（C→T）（22.30%），这与东莞、深圳的β地贫基因型骤变类型共同，而重庆、云南区域的β地贫基因型骤变类型以CD17（A→T）最多，其次为CD41-42（-TCTT）、IVS-Ⅱ-654（C→T）[17-18]；广东、广西β地贫基因型骤变类型以CD41-42（-TCTT）最多[4，13]，这标明不同地域和不同人群的β地贫基因骤变谱的构成也不尽相同[19]。
本研讨还发现，MCV或MCH作为地贫筛查的目标，其灵敏度可达90%以上，但特异性偏低，分别为54.18%、51.90%、49.24%，首要是因为其他一些小细胞低色素性贫血的搅扰所造成的，其间以缺铁性贫血最为常见，临床上能够经过测定血清铁蛋白加以辨别确诊[1]。此外，本实验室只检测3种常见缺失型α-地贫基因（--SEA、-α3.7、-α4.2），关于罕见的缺失型α-地贫基因[--THAI，--FIL，--MED，-（α）20.5]以及非缺失型α-地贫基因（αCSα、αQSα及αWSα）没有检测，这也是导致初筛特异性偏低的原因之一[20]。也有研讨标明[16]，当MCV、MCH均下降，HbA2>4.0%时，应高度置疑β地贫，因而持续讨论HbA2、MCV+MCH+HbA2联合计划对临床的使用价值，值得进一步研讨。
综上所述，关于地贫基因的初筛，不管是一级筛查仍是二级筛查，都有漏检的可能性。在临床工作中，特别是优生遗传咨询的医师，关于有地贫宗族史且有血液学表型反常但惯例基因检测又未见反常的标本，需通知检测者要进一步选用基因测序等技能进一步确诊，以进步地贫基因带着的检出率及准确性，削减因漏检及假阳性给家庭和社会带来的损害。
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（收稿日期：2017-03-15 本文修改：任 念）
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