陈建明+童晓洁+陈瑾
[摘要] 意图 研讨丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。 办法 将人牙周膜成纤维细胞培育在含不同浓度的丹参酮ⅡA培育液中（试验组），一同设不含丹参酮ⅡA的空白对照组，24、48、72 h后，以CCK-8法检测细胞的增殖状况。 成果 在倒置显微镜下，试验组贴壁人牙周膜成纤维细胞数目显着削减。加药培育48、72 h，不同浓度丹参酮ⅡA组细胞的光密度（OD）值显着低于对照组，差异有计算学含义（P<0.001）。 定论 丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖有必定的按捺效果。
[关键词] 丹参酮ⅡA；人牙周膜成纤维细胞；牙周安排；改建
[中图分类号] R780.2[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）04（c）-0021-03
The effect of tanshinoneⅡA on proliferation of human periodontal ligament fibroblasts
CHEN Jian-ming TONG Xiao-jie CHEN Jin
Stomatology of Guangzhou Medical University;Stomatology Hospital Affiliated to Guangzhou Medical University;Key Laboratory of Oral Medicine,Guangzhou Medical University,Guangzhou 510140,China
[Abstract] Objective To study the effect of tanshinoneⅡA on proliferation of human periodontal ligament fibroblasts.Methods Human periodontal ligament fibroblasts was cultured in different concentrations of tanshinoneⅡA suspension in vitro (experimental group),control group without tanshinoneⅡA was selected.After 24 h,48 h,72 h,cell proliferation ability was examined by CCK-8.Results Less adherent cells were found in experimental groups under an inverted microscope.Meanwhile,after 48 and 72 hours culture,the OD values of experimental groups was lower than that of control group,had significant difference (P<0.001).Conclusion TanshinoneⅡA may inhibit the proliferation of human periodontal ligament fibroblasts.
[Key words] TanshinoneⅡA;Human periodontal ligament fibroblasts;Periodontal tissue;Remodeling
在口腔正畸医治进程中，要把牙齿重新排列，需要对牙槽骨不断进行改建，而这个缓慢的进程有赖于成骨与破骨之间平衡的坚持，触及具有吸收骨质的破骨细胞、具有成骨功用的成骨细胞和牙周膜成纤维细胞杂乱而严密的偶联反响。怎样才干加速牙齿移动速度、缩短坚持时刻一直是国内外学者探究的课题。有学者研讨发现，丹参酮ⅡA对破骨细胞有按捺效果[1]。而许多细胞因子经过效果于成骨细胞，然后直接地调理破骨细胞的分解老练。因为牙周膜成纤维细胞具有成骨样细胞表型特征[2]，猜想丹参酮ⅡA可能会对牙周膜成纤维细胞发生按捺效果。本研讨旨在评论丹参酮ⅡA对牙周膜成纤维细胞增殖的影响，以期为临床牙周安排改建供给新的思路和办法。
1 材料与办法
1.1 试验试剂与仪器
α-MEM培育基、胎牛血清（Gibco，USA）、丹参酮ⅡA（Sigma，USA），CCK-8试剂盒（南京凯基公司）、倒置相差显微镜（Olympus，日本）、酶标仪（Thermo，USA）、恒温CO2培育箱（Thermo，USA）。
1.2 试验办法
1.2.1 细胞培育人牙周膜取自正畸牙的患者，患者年纪12～29岁，刮取牙根中1/3牙周膜，均匀铺于6孔板内，参加含15%胎牛血清的α-MEM培育液，饱和湿度、5%CO2、95%空气，37℃（规范环境）孵育，每3～5天换一次液，直至细胞从安排块游离出并长满。当原代人牙周膜成纤维细胞约80%融合时，再以1∶3或1∶4传代。将第5代细胞用于试验。
1.2.2 试验分组与处理取对数生长期人牙周膜成纤维细胞制成2×108/L细胞悬液，接种于96孔板，每孔100 μl，培育24 h后，别离更换为20、40、60 μg/ml丹参酮ⅡA的α-MEM培育液（每孔100 μl），每组设4个复孔，一同设不含丹参酮ⅡA的空白对照组。持续培育24、48、72 h后，在相差显微镜下调查各组的细胞形状。
1.2.3 CCK-8法检测丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响持续培育24、48、72 h后，向各孔中参加10 μl新式细胞增殖及毒性检测溶液。37℃下孵育2 h，酶标仪在450 nm波利益检测每孔的光密度（OD）值。
1.3 计算学剖析
选用SPSS 19.0计算软件进行数据剖析，计量材料用均数±规范差标明，不一同间段选用单要素ANOVA查验及多样本均数间两两比较，以P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 不同浓度丹参酮ⅡA对牙周膜成纤维细胞的形状学调查
不同浓度的丹参酮ⅡA效果人牙周膜成纤维细胞24 h后，对照组细胞根本贴壁，细胞形状呈梭型；试验组细胞仅存少数的贴壁细胞。培育48 h后，对照组牙周膜成纤维细胞根本长满培育孔底；20 μg/ml组中，贴壁细胞较24 h前增多，细胞呈梭形；40 μg/ml组与60 μg/ml组培育孔中，仅见少数的贴壁细胞，细胞形状呈不规则形。培育72 h后，对照组牙周膜成纤维细胞彻底长满培育孔底；20 μg/ml组与40 μg/ml组中，贴壁细胞较少，细胞形状多样；60 μg/ml组培育孔中，仅见少量的贴壁细胞（图1）。
图1 人牙周膜成纤维细胞在不同浓度丹参酮ⅡA中培育
24、48、72 h后的形状
2.2 不同浓度丹参酮ⅡA对牙周膜成纤维细胞增殖活性影响的OD值
加丹参酮ⅡA培育24 h后，不同浓度组的OD值与对照组比较，差异无计算学含义（P＞0.05）；各组间两两比较，差异无计算学含义（P＞0.05）。加丹参酮ⅡA培育48、72 h后，不同浓度组的OD值与对照组比较，差异有计算学含义（P<0.001）；各浓度组间两两比较，差异无计算学含义（P＞0.05）（表1、图2）。
表1 不同浓度丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖活性影响的OD值（x±s）
与对照组比较，*P<0.001
图2 不同浓度丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响
与对照组比较，*P<0.001
3 评论
牙周膜细胞是一组有异质性的细胞群，包含了成牙骨质细胞、成骨细胞和牙周膜成纤维细胞等，其间成骨细胞和牙周膜成纤维细胞是牙周安排中的两种重要的细胞成分，它们与破骨细胞一同参加牙周骨质平衡的保持，关于安稳正常牙周膜的生理功用起关键效果。
Kwak等[3]研讨发现，丹参酮ⅡA经过调控成骨细胞上的NF-κB的配体和骨维护从来调理破骨细胞的活性。研讨还发现，丹参酮ⅡA对破骨细胞分解的按捺效果是丹参酮ⅡA经过效果于成骨细胞，按捺其前列腺素E2/环氧化酶-2信号途径而完成的。
研讨标明，牙周膜成纤维细胞与成骨细胞具有相似之处，牙周膜成纤维细胞有向成骨细胞分解的趋势，在必定状况下，能够表现出成骨细胞的特征[4-5]。Kanzaki等[6]将末梢血单核细胞与牙周膜成纤维细胞进行直接或直接共培育4周，直接共培育系统中牙本质片上构成较多的骨吸收陷窝，一同发现牙周膜成纤维细胞能够表达核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）和骨维护素（OPG）。张丁等[7]也在人牙周膜细胞胞膜和胞质上发现RANKL蛋白的表达，一同在培育液中检测到OPG蛋白，阐明牙周膜成纤维细胞可能会像成骨细胞相同，也能够参加破骨细胞的调理。
近来，有学者发现丹参酮ⅡA也参加牙周安排改建。张晓燕等[8]发现，丹参酮能促进牙槽骨骨构成和按捺骨吸收，防治牙槽骨骨质疏松。进一步阐明，丹参酮ⅡA、破骨细胞、牙周膜成纤维细胞间存在亲近的联络。本试验成果显现牙周膜成纤维细胞在丹参酮ⅡA效果48、72 h后，其增殖受到了显着的按捺，其间以40 μg/ml组最为显着。从前笔者研讨发现，末梢血单个核细胞作为破骨细胞的前体细胞，只要在牙周膜成纤维细胞存在的条件下，才干构成多核的破骨样细胞，其独自存在无法构成破骨细胞[9]。因而，猜想丹参酮ⅡA有可能经过按捺牙周膜成纤维细胞，直接发生按捺破骨细胞的效果，可是，其详细机制有待进一步研讨。
[参考文献]
[1]Kim HH，Kim JH，Kwak HB，et al.Inhibition of osteoclast differentiation and bone resorption by tanshinone ⅡA isolated from Salvia miltiorrhiza Bunge[J].Biochem Pharmacol，2004，67（9）：1647-1656.
[2]骆凯，闫福华，金岩，等.体外培育人牙周膜成纤维细胞及其成骨表型特征检测[J].口腔医学，2004，24（1）：8-10.
[3]Kwak HB，Sun HM，Ha H，et al.Tanshinone ⅡA suppresses inflammatory bone loss by inhibiting the synthesis of prostaglandin E2 in osteoblasts[J].Eur J Pharmacol，2008， 601（1-3）：30-37.
[4]Liang L，Yu JF，Wang Y，et al.Effect of estrogen receptor beta on the osteoblastic differentiation function of human periodontal ligament cells[J].Arch Oral Biol，2008，53（6）：553-557.
[5]Dereka XE，Markopoulou CE，Mamalis A，et al.Effect of rhBMP-7 combined with two bone grafts on human periodontal ligament cell differentiation[J].Growth Factors，2009，27（5）：274-279.
[6]Kanzaki H，Chiba M，Shimizu Y，et al.Dual regulation of osteoclast differentiation by periodontal ligament cells through RANKL stimulation and OPG inhibition[J].J Dent Res，2001，80（3）：887-891.
[7]张丁，杨雁琪，李小彤，等.人牙周膜细胞骨维护因子和破骨细胞分解因子蛋白的表达及1α，25（OH）2维生素D3的调理[J].北京大学学报（医学版），2004，36（6）：646-649.
[8]张晓燕，崔燎，吴铁，等.丹参酮对去卵巢大鼠牙槽骨丢掉的按捺效果[J].我国老年学杂志，2012，32（1）：113-114.
[9]陈建明，兰泽栋，刘嵘.牙周膜成纤维细胞对外周血单个核细胞分解的影响[J].口腔医学研讨，2011，27（9）：808-811.
（收稿日期：2014-03-12本文修改：郭静娟）
[基金项目] 广东省中医药局赞助项目（20121129）
[作者简介] 陈建明（1982-），男，汉族，福建人，硕士，主治医师，首要从事口腔正畸学根底与临床研讨
表1 不同浓度丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖活性影响的OD值（x±s）
与对照组比较，*P<0.001
图2 不同浓度丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响
与对照组比较，*P<0.001
3 评论
牙周膜细胞是一组有异质性的细胞群，包含了成牙骨质细胞、成骨细胞和牙周膜成纤维细胞等，其间成骨细胞和牙周膜成纤维细胞是牙周安排中的两种重要的细胞成分，它们与破骨细胞一同参加牙周骨质平衡的保持，关于安稳正常牙周膜的生理功用起关键效果。
Kwak等[3]研讨发现，丹参酮ⅡA经过调控成骨细胞上的NF-κB的配体和骨维护从来调理破骨细胞的活性。研讨还发现，丹参酮ⅡA对破骨细胞分解的按捺效果是丹参酮ⅡA经过效果于成骨细胞，按捺其前列腺素E2/环氧化酶-2信号途径而完成的。
研讨标明，牙周膜成纤维细胞与成骨细胞具有相似之处，牙周膜成纤维细胞有向成骨细胞分解的趋势，在必定状况下，能够表现出成骨细胞的特征[4-5]。Kanzaki等[6]将末梢血单核细胞与牙周膜成纤维细胞进行直接或直接共培育4周，直接共培育系统中牙本质片上构成较多的骨吸收陷窝，一同发现牙周膜成纤维细胞能够表达核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）和骨维护素（OPG）。张丁等[7]也在人牙周膜细胞胞膜和胞质上发现RANKL蛋白的表达，一同在培育液中检测到OPG蛋白，阐明牙周膜成纤维细胞可能会像成骨细胞相同，也能够参加破骨细胞的调理。
近来，有学者发现丹参酮ⅡA也参加牙周安排改建。张晓燕等[8]发现，丹参酮能促进牙槽骨骨构成和按捺骨吸收，防治牙槽骨骨质疏松。进一步阐明，丹参酮ⅡA、破骨细胞、牙周膜成纤维细胞间存在亲近的联络。本试验成果显现牙周膜成纤维细胞在丹参酮ⅡA效果48、72 h后，其增殖受到了显着的按捺，其间以40 μg/ml组最为显着。从前笔者研讨发现，末梢血单个核细胞作为破骨细胞的前体细胞，只要在牙周膜成纤维细胞存在的条件下，才干构成多核的破骨样细胞，其独自存在无法构成破骨细胞[9]。因而，猜想丹参酮ⅡA有可能经过按捺牙周膜成纤维细胞，直接发生按捺破骨细胞的效果，可是，其详细机制有待进一步研讨。
[参考文献]
[1]Kim HH，Kim JH，Kwak HB，et al.Inhibition of osteoclast differentiation and bone resorption by tanshinone ⅡA isolated from Salvia miltiorrhiza Bunge[J].Biochem Pharmacol，2004，67（9）：1647-1656.
[2]骆凯，闫福华，金岩，等.体外培育人牙周膜成纤维细胞及其成骨表型特征检测[J].口腔医学，2004，24（1）：8-10.
[3]Kwak HB，Sun HM，Ha H，et al.Tanshinone ⅡA suppresses inflammatory bone loss by inhibiting the synthesis of prostaglandin E2 in osteoblasts[J].Eur J Pharmacol，2008， 601（1-3）：30-37.
[4]Liang L，Yu JF，Wang Y，et al.Effect of estrogen receptor beta on the osteoblastic differentiation function of human periodontal ligament cells[J].Arch Oral Biol，2008，53（6）：553-557.
[5]Dereka XE，Markopoulou CE，Mamalis A，et al.Effect of rhBMP-7 combined with two bone grafts on human periodontal ligament cell differentiation[J].Growth Factors，2009，27（5）：274-279.
[6]Kanzaki H，Chiba M，Shimizu Y，et al.Dual regulation of osteoclast differentiation by periodontal ligament cells through RANKL stimulation and OPG inhibition[J].J Dent Res，2001，80（3）：887-891.
[7]张丁，杨雁琪，李小彤，等.人牙周膜细胞骨维护因子和破骨细胞分解因子蛋白的表达及1α，25（OH）2维生素D3的调理[J].北京大学学报（医学版），2004，36（6）：646-649.
[8]张晓燕，崔燎，吴铁，等.丹参酮对去卵巢大鼠牙槽骨丢掉的按捺效果[J].我国老年学杂志，2012，32（1）：113-114.
[9]陈建明，兰泽栋，刘嵘.牙周膜成纤维细胞对外周血单个核细胞分解的影响[J].口腔医学研讨，2011，27（9）：808-811.
（收稿日期：2014-03-12本文修改：郭静娟）
[基金项目] 广东省中医药局赞助项目（20121129）
[作者简介] 陈建明（1982-），男，汉族，福建人，硕士，主治医师，首要从事口腔正畸学根底与临床研讨
表1 不同浓度丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖活性影响的OD值（x±s）
与对照组比较，*P<0.001
图2 不同浓度丹参酮ⅡA对人牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响
与对照组比较，*P<0.001
3 评论
牙周膜细胞是一组有异质性的细胞群，包含了成牙骨质细胞、成骨细胞和牙周膜成纤维细胞等，其间成骨细胞和牙周膜成纤维细胞是牙周安排中的两种重要的细胞成分，它们与破骨细胞一同参加牙周骨质平衡的保持，关于安稳正常牙周膜的生理功用起关键效果。
Kwak等[3]研讨发现，丹参酮ⅡA经过调控成骨细胞上的NF-κB的配体和骨维护从来调理破骨细胞的活性。研讨还发现，丹参酮ⅡA对破骨细胞分解的按捺效果是丹参酮ⅡA经过效果于成骨细胞，按捺其前列腺素E2/环氧化酶-2信号途径而完成的。
研讨标明，牙周膜成纤维细胞与成骨细胞具有相似之处，牙周膜成纤维细胞有向成骨细胞分解的趋势，在必定状况下，能够表现出成骨细胞的特征[4-5]。Kanzaki等[6]将末梢血单核细胞与牙周膜成纤维细胞进行直接或直接共培育4周，直接共培育系统中牙本质片上构成较多的骨吸收陷窝，一同发现牙周膜成纤维细胞能够表达核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）和骨维护素（OPG）。张丁等[7]也在人牙周膜细胞胞膜和胞质上发现RANKL蛋白的表达，一同在培育液中检测到OPG蛋白，阐明牙周膜成纤维细胞可能会像成骨细胞相同，也能够参加破骨细胞的调理。
近来，有学者发现丹参酮ⅡA也参加牙周安排改建。张晓燕等[8]发现，丹参酮能促进牙槽骨骨构成和按捺骨吸收，防治牙槽骨骨质疏松。进一步阐明，丹参酮ⅡA、破骨细胞、牙周膜成纤维细胞间存在亲近的联络。本试验成果显现牙周膜成纤维细胞在丹参酮ⅡA效果48、72 h后，其增殖受到了显着的按捺，其间以40 μg/ml组最为显着。从前笔者研讨发现，末梢血单个核细胞作为破骨细胞的前体细胞，只要在牙周膜成纤维细胞存在的条件下，才干构成多核的破骨样细胞，其独自存在无法构成破骨细胞[9]。因而，猜想丹参酮ⅡA有可能经过按捺牙周膜成纤维细胞，直接发生按捺破骨细胞的效果，可是，其详细机制有待进一步研讨。
[参考文献]
[1]Kim HH，Kim JH，Kwak HB，et al.Inhibition of osteoclast differentiation and bone resorption by tanshinone ⅡA isolated from Salvia miltiorrhiza Bunge[J].Biochem Pharmacol，2004，67（9）：1647-1656.
[2]骆凯，闫福华，金岩，等.体外培育人牙周膜成纤维细胞及其成骨表型特征检测[J].口腔医学，2004，24（1）：8-10.
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[4]Liang L，Yu JF，Wang Y，et al.Effect of estrogen receptor beta on the osteoblastic differentiation function of human periodontal ligament cells[J].Arch Oral Biol，2008，53（6）：553-557.
[5]Dereka XE，Markopoulou CE，Mamalis A，et al.Effect of rhBMP-7 combined with two bone grafts on human periodontal ligament cell differentiation[J].Growth Factors，2009，27（5）：274-279.
[6]Kanzaki H，Chiba M，Shimizu Y，et al.Dual regulation of osteoclast differentiation by periodontal ligament cells through RANKL stimulation and OPG inhibition[J].J Dent Res，2001，80（3）：887-891.
[7]张丁，杨雁琪，李小彤，等.人牙周膜细胞骨维护因子和破骨细胞分解因子蛋白的表达及1α，25（OH）2维生素D3的调理[J].北京大学学报（医学版），2004，36（6）：646-649.
[8]张晓燕，崔燎，吴铁，等.丹参酮对去卵巢大鼠牙槽骨丢掉的按捺效果[J].我国老年学杂志，2012，32（1）：113-114.
[9]陈建明，兰泽栋，刘嵘.牙周膜成纤维细胞对外周血单个核细胞分解的影响[J].口腔医学研讨，2011，27（9）：808-811.
（收稿日期：2014-03-12本文修改：郭静娟）
[基金项目] 广东省中医药局赞助项目（20121129）
[作者简介] 陈建明（1982-），男，汉族，福建人，硕士，主治医师，首要从事口腔正畸学根底与临床研讨
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